Caracterização do efeito imunomodulatório das células mesenquimais indiferenciadas na resposta inflamatória a Porphyromonas gingivalis / Role of periodontal-derived mesenchymal stem cells in Porphyromonas gingivalis infection

O objetivo deste estudo foi caracterizar as respostas das células mesenquimais indiferenciadas derivadas do ligamento periodontal (PDLSCs) ao extrato proteico total de Porphyromonas gingivalis (PgPE) e avaliar seu impacto nas propriedades biológicas das células leucêmicas promielocíticas humanas HL-60. PDLSCs enriquecidas com CD105 foram semeadas em placas de 6 poços durante 24h. Em seguida, as células foram desafiadas com PgPE (0 e 2 mg/ml) durante 3h (período de exposição). Os sobrenadantes foram então descartados; PDLSCs foram lavadas com PBS e cultivadas por 18h adicionais. Por fim, os sobrenadantes foram coletados. Os níveis de citocinas e quimiocinas nos sobrenadantes foram avaliados por ensaios multiplex. Na sequência, o efeito dos sobrenadantes derivados de PDLSCs (tratadas ou não com PgPE) sobre a ativação, o recrutamento e a resposta inflamatória de HL-60 foi avaliado. PDLSCs responderam ao tratamento com PgPE. RANTES, eotaxina e IP-10 (proteína produzida por IFN-?) foram detectados apenas em sobrenadantes de PDLSCs/PgPE. Além disso, PgPE induziu maior secreção de proteína quimiotática de neutrófilos (MCP)-1, intérferon (IFN)-?, interleucina (IL)-6, IL-8 e IL-1ra (p> 0,05). O recrutamento de HL-60D aumentou 4,7 vezes quando estas células foram expostas a sobrenadantes PDLSCs/PgPE, enquanto que os sobrenadantes de PDLSCs não afetaram a quimiotaxia de HL-60D. Sobrenadantes PDLSCs promoveram uma redução de 16% na produção de espécies de oxigênio reativo (ROS) por HL-60D estimuladas por PMA (p=0,013). Em contraste, sobrenadantes PDLSCs/PgPE promoveram um aumento de 1,78±1,04 vezes (p=0,046) na produção de ROS. Finalmente, tanto sobrenadantes PDLSCs, como sobrenadantes PDLSCs/PgPE, não influenciaram a produção de fator de necrose tumoral (TNF)-? e IL-1? pelas HL-60D em resposta ao lipopolissacarídeo (LPS). Esses achados sugerem um importante papel das PDLSCs no reconhecimento de P. gingivalis, recrutamento de células imunes inatas e ativação de mecanismos antimicrobianos.

Influência do fator mecânico na formação de lesões cervicais não cariosas / Influence of the mechanical factor on the formation of non-carious cervical lesions

Lesões cervicais não cariosas têm etiologia multifatorial, com ênfase na ação de ácidos, abrasivos e cargas mecânicas aplicadas à distância do local da lesão, mas que concentram tensão na região cervical, que é o local da lesão. O mecanismo de ação das cargas aplicadas à distância não foi ainda elucidado. Pensou-se que seria mediado por micro fraturas que fariam se desprender fragmentos de tecido (abfração); mas isto não explicaria a formação de lesões produzidas na presença de compressão, mesmo concentrada, nem a interação sinérgica na presença de ácidos. Além disso, as fraturas nunca foram localizadas no tecido. Uma outra hipótese considera os tecidos dentários como esponjas rígidas, deformáveis, capazes de expelir a sua própria água quando comprimidos ou absorver fluidos circundantes quando tracionados. Quando a carga fosse removida e o tecido recuperasse sua forma original, o fluido faria o caminho inverso. Assim, a ciclagem mecânica forçaria a circulação de fluidos circundantes no tecido e, se fossem ácidos, facilitaria a dissolução do tecido, tanto sob tração quanto sob compressão. A proposta do estudo foi avaliar a penetração de fluido traçador (nitrato de prata a 10 %) no esmalte de espécimes submetidos ou não a cargas cíclicas excêntricas que provocam compressão ou tração. Os espécimes foram construídos a partir de incisivos bovinos, cortados em paralelepípedos de 3x3x8,2 mm, com entalhe na dentina para formar um pescoço de 2x2 mm de seção transversal. Os espécimes, exceto uma faixa central do esmalte vestibular de 1,5x5 mm foram protegidos da penetração do traçador com verniz. Foram aplicados 1.200 ciclos mecânicos de carga excêntrica para produzir tensões de tração ou compressão no esmalte, com 5 s de carga de 40 N e 25 s sem carga. Um grupo controle não recebeu nem carga nem exposição ao traçador; outro controle recebeu apenas exposição ao traçador, sem carga; outros dois grupos controles receberam carga (de tração ou compressão) enquanto imersos em água e, imediatamente depois, foram expostos ao traçador durante 600 min. Os dois grupos teste foram expostos simultaneamente aos ciclos de carga (de tração ou de compressão) e ao traçador. A prata do traçador foi precipitada por exposição a fixador radiográfico e, posteriormente, à luz de fotopolimerizador (5 min). Para localizar o traçador os espécimes foram micro tomografados, radiografados e, posteriormente, foram cortados longitudinalmente para obter uma fatia central de 1 mm de espessura para avaliação em lupa, com luz refletida ou transmitida. A micro tomografia foi ineficaz devido aos artefatos formados. As radiografias marcaram apenas as regiões de maior concentração do traçador. A avaliação dos cortes em lupa binocular permitiu concluir que existem variações de padrão de coloração natural do esmalte de incisivos bovinos, que todos os espécimes expostos ao traçador, independentemente do grupo experimental, apresentaram alguma infiltração, pelo menos numa camada fina e uniforme da superfície exposta. Além da fina camada marcada, existe variação de padrões de penetração do traçador, mesmo entre os que receberam um mesmo tratamento experimental, o que pode ser devido a variações inevitáveis no histórico de cada dente. Isto, apesar de se tornar um inconveniente para identificar um possível efeito de bombeamento, poderia ser identificado também como um indicador de que podem existir diferenças na velocidade e profundidade de penetração no esmalte de outras moléculas como, por exemplo, as dos ácidos. Em resumo, o corante traçador penetrou no esmalte dos espécimes de incisivos bovinos sem diferenças claras de padrão de penetração entre os diferentes grupos e pode ser um método eficaz para comprovar a hipótese de circulação forçada, mas exigirá novos estudos.